Contaminación con ADN en las vacunas contra el Virus del Papiloma Humano

Un problema de seguridad como este no debe ser ocultado por los organismos reguladores, dice el Prof. Joe Cummins

Por el Prof. Joe Cummins, 12 de septiembre de 2012

Instituto de Ciencia en Sociedad, ISIS

 Con el reciente descubrimiento de la contaminación con ADN de la vacuna Gardasil contra el Virus del Papiloma Humano (VPH), la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) de los Estados Unidos no perdió el tiempo declarando que el ADN no supone ningún tipo de contaminación, sino que se trata de un subproducto inofensivo que se obtiene en la producción de las vacunas. Es algo con lo que no estoy de acuerdo, ya que el ADN extraño es potencialmente dañino. También hay que señalar que la seguridad y la eficacia de las vacunas contra el VPH es algo muy controvertido desde el inicio de su administración ( véase [1] The HPV Vaccine Controversy and other articles in the series, SiS 41).

El virus

El VPH sólo prospera en los queratinocitos de la piel o en las membranas mucosas. Aunque la mayoría de tipos conocidos de virus del VPH no causan ningún síntoma en la mayoría de las personas, algunos tipos pueden producir verrugas, mientras que otros pueden provocar cáncer del cuello del útero, vulva, vagina, pene, ano y orofaringe.

Recientemente se ha establecido una relación entre el VPH y la posibilidad de un mayor riesgo de enfermedades cardiovasculares. Además, las infecciones por VPH 16 y 18 están asociadas a un mayor riesgo de desarrollar cáncer de garganta. En todo el mundo durante el año 2002, se estima que se produjeron 561. 200 nuevos casos de cáncer (5,2%) atribuibles al VPH, siendo el VPH una de las causas infecciosas más importantes del cáncer, de los cuales el de cuello uterino es el segundo tipo de cáncer más común entre las mujeres de todo el mundo. En 2008, se estimaba que se habían producido 529.000 nuevos casos de cáncer de cuello de útero y 274.000 muertes; más del 85% de las muertes en los países en desarrollo, donde representa el 13% de todos los cánceres femeninos.

El genoma viral

El genoma del VPH está formado por 8 genes, con una región que codifica las proteínas y otra región de “no codificación de proteínas” formada por genes reguladores. Los genes se distinguen por participar en el funcionamiento tardío o temprano en el desarrollo del virus. Los genes tempranos participan en la replicación del virus y en la transcripción junto con los oncogenes para el desarrollo del cáncer. Los genes tardíos codifican dos proteínas estructurales L1 y L2 de la cápside del virus. El VPH infecta las células basales del epitelio cervical cuando éste se encuentra dañado. El genoma viral se establece en las células basales como un episoma ( un microsoma nuclear que se reproduce independientemente). El episoma se reproduce en tándem con los cromosomas de la célula y forma partículas virales. Las partículas virales completas se encuentran en las células más externas del epitelio y los virus se propagan al abandonar las células del epitelio. Algunas de las proteínas del virus deben ejercer como oncoproteínas, transformándose las células epiteliales a un estado precanceroso. Sin embargo, es precisa una infección por VPH para la formación del cáncer, pero no suficiente. En las lesiones más importantes y en el cáncer, un episoma se integra en el cromosoma de la célula. Esta integración interrumpe la transcripción de una proteína viral reguladora que controla la producción de las proteínas del cáncer, lo que lleva a su producción continua y en aumento [3] (Recombinant Cervical Cancer Vaccines, SiS 29). La integración del VPH en los cromosomas humanos no es algo aleatorio: hay regiones calientes en las que se integran las regiones cromosómicas homólogas a las del oncogén E5 del VPH o la proteína estructural L2 (4). En las mujeres con cáncer de cuello uterino se ha encontrado que los cromosomas virales están integrados completa o parcialmente como fragmentos de cromosomas, o como episomas independientes. La integración parcial del VPH era más frecuente en las mujeres con cáncer, mientras que la integración completa del virus presentaba aproximadamente la mitad de la frecuencia, siendo la forma episomal rara. La integración que produce cáncer rompe el cromosoma de VPH en la región E1/E2, causando la pérdida de esta región. Como consecuencia se pierde el control de los genes E6 y E7 del cáncer. El gen E7 del cáncer produce una proteína que inactiva el gen del retinoblastoma, un gen supresor del cáncer, de la célula huésped, facilitando el desarrollo del cáncer (5). (El retinoblastoma es un cáncer en el ojo causado por la pérdida del gen del retinoblastoma). La lección principal es que la fragmentación o rotura del ADN del VPH es un factor importante en la progresión del cáncer en la célula huésped.

Transcripción de genes

Los genes virales tienen un patrón complejo de transcripción. Hay un único promotor para todos los genes tempranos. El promotor temprano inicia la producción de un pre-ARN mensajero a partir del cual los mensajes que contienen exones o intrones se empalman uno a continuación de otro para generar cada una de las proteínas tempranas. El otro promotor viral inicia la producción del premensajero para las formación de las proteínas estructurales L1 y L2, que también contienen los exones e intrones, que se empalman de manera similar antes de la traducción del ARN mensajero en proteína. Hay señales de poliadenilación temprana y tardía (poli-A) para la transcripción del pre-ARN mensajero. La expresión de genes de VPH está estrechamente relacionada con el estado de desarrollo de las células huésped (6).

El micro-ARN es muy pequeño ( una cadena formada por unos 22 nucleótidos), que no codifican, sino que tienen la capacidad de regular la expresión de otros genes. Los micro-ARN se encuentran modificados en un cierto número de cánceres humanos, y es significativamente elevado en el cáncer anal producido por el VPH (7). Un grupo de micro-ARN se encuentran asociados con cánceres producidos por el VPH en la cabeza y el cuello (8). Los cánceres de VPH muestran un patrón complejo de transcripción de genes y micro-ARN implicados en el desarrollo de estos cánceres.

Vacunas contra el VPH

Las vacunas contra el VPH se están aplicando en todo el mundo desde 2006. Se comercializan dos vacunas: Gardasil, fabricada por Merck, y Cervarix, fabricada por GlaxoSmithKline. Tienen un carácter profiláctico, es decir, previenen contra el cáncer de cuello uterino, pero no curan las infecciones existentes. Se basan en partículas virales L1 para lograr la inmunidad contra el VPH. La proteína L1 es capaz de autoensamblarse para formar partículas similares a virus vacíos que activan el sistema inmunitario humano para formar anticuerpos. Los VPH contra los que están destinados las vacunas son de alto riesgo los tipos 16 y 18 y de bajo riesgos los tipos 6 y 11. Las dos vacunas comercializadas contra el VPH se han desarrollado a partir del cultivo en el laboratorio de microorganismos modificados genéticamente (OGM). Gardasil protege contra cuatro tipos del VPH, ya que contiene partículas similares a los virus con mezclas de las cuatro subunidades de proteínas, por cual es una vacuna tetravalente. Las cuatro proteínas L1 se fabrican utilizando levadura de panificación modificada genéticamente. Cervarix protege contra los tipos de VPH 16 y 18, siendo por tanto una vacuna bivalente, y se fabrica utilizando baculovirus modificados genéticamente a partir de cultivos de células de insecto (9).

Gardasil

La vacuna se compone de cuatro productos monovalentes adsorbidos (MBAP) para cauda uno de los cuatro tipos de virus del papiloma humano (VPH). Los componentes activos de cada producto monovalente adsorbido lo forman partículas similares a virus (VLP) de la cápside recombinante (L1) de las proteínas de VPH, producidas en Saccharomyces cerevisiae recombinante. El vector de expresión de la levadura pGAL110 fue utilizado para las cuatro proteínas HPVL1. Los genes L1 se obtuvieron mediante un protocolo de clonación directa. Sin embargo, la secuencia de codificación para HPV11L1 fue reconstruida sintéticamente sobre la base de secuencias de nucleótidos HPV6L1 gracias a la buena expresión de VLP en la levadura. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se utilizó para subclonar los genes L1 en el vector pGAL110 de expresión en la levadura, que contiene los promotores GAL1-GAL10 y el terminador ADH1 de la levadura (ADH1t) para la finalización de la transcripción y la poliadenilación. Los vectores de la levadura pGAL110 relacionados con la expresión de cada uno de los cuatro tipos de VPH se utilizan para transformar el Saccharomyces cerevisiae recombinante (10). (Véase también: http://www.ema.europa.eu/docs/es_ES/document_library/EPAR_-_Summary_for_the_public/human/000703/WC500021146.pdf

Contaminación por ADN de la vacuna Gardasil

En 2011 se descubrió la contaminación por ADN recombinante del VPH en todos los lotes de vacunas que se han comercializado en los Estados Unidos, Australia, Nueva Zelanda, España, Francia y Polonia. Uno de los fragmentos identificados de ADN era un fragmento de la proteína L1 de la cápside del VPH (11). La organización Sane Vax encontró en la sangre de una niña de 13 años de edad ADN del VPH dos años después de la administración de Gardasil (12). Otros contaminantes de ADN no han logrado identificarse específicamente en las muestras de vacunas, pero presumiblemente se trate de fragmentos de ADN de la levadura modificada genéticamente para producir la proteína de la vacuna. A pesar de que la FDA y el fabricante de la vacuna habían afirmado desde el principio que Gardasil no contenía ADN, más tarde rectificó y ahora dicen que el ADN del gen L1 del VPH presente en la vacuna no es un contaminante, sino que es una consecuencia normal de la producción de las vacunas. El resto de fragmentos de ADN se consideran seguros (13). La Organización Mundial de la Salud (OMS) había afirmado con anterioridad que los fragmentos de ADN con una longitud menor de 200 pares de bases debían considerarse seguros (14). Parece que la Corporación Merck, la FDA y la OMS están cerrando filas para insistir en que el contaminante de ADN en las vacunas es seguro, sin ningún tipo de pruebas.

Los contaminantes de ADN en Gardasil, fragmentos de genes L1 y fragmentos de ADN de la levadura, tales como el promotor GAL1-GAL10 y el terminador ADH1 que flanquea el gen sintético L1 usado para producir la vacuna, puede que no suponga ninguna amenaza para las vacunadas con Gardasil, pero lo que es totalmente inaceptable es que se presuma de tal sin ninguna evaluación o evidencia experimental. De hecho, los fragmentos cortos de ADN se pueden incorporar al genoma humano. Aunque la levadura que se usa para producir la vacuna no tenga los pequeños ARN reguladores, empleados por la mayoría de los organismos, desde las bacterias hasta los seres humanos, si contiene abiertos 247 pequeños marcos de lectura, incluyendo 22 secuencias cortas de ADN que especifican péptidos implicados en el crecimiento celular o en la producción de daños en el ADN o la detención de la replicación. Al menos un producto del gen de la levadura inactiva el gen p53 supresor del cáncer y de esta manera promueve el cáncer en los organismos multicelulares (15). La integración de L1 y/o de los genes de la levadura puede ayudar al desarrollo del cáncer en numerosos tejidos corporales. Se sabe desde hace tiempo que el ADN ingerido puede unirse convalentemente al ADN de las células sanguíneas de los mamíferos, a las células del hígado, a los macrófagos del bazo y la células T (16), y la transferencia horizontal de genes y la recombinación a través de la circulación de los ácidos nucleicos, ya es bien conocido [17] (Intercommunication via Circulating Nucleic Acids, SiS 42) .

Cervarix

Cervarix contiene proteínas recombinantes (truncadas) C-terminal L1 de la cápside de los VPH 16 y 18, como ingredientes activos. Las proteínas de VPH-16 y VPH-18 se producen por separado utilizando un sistema de expresión de baculovirus recombinante y una linea celular de insecto, Hi-5 Rix4446, derivada de Trichoplusia. Después de extraer las proteínas L1 y el posterior proceso de purificación, se ensamblan por separado como VLP. Las VLP de cada tipo de VPH se formulan con el sistema adyuvante AS04, compuesto por hidróxido de aluminio y el monofosforil lípido A (MPL)3 3. El MPL es un inmunoestimulante derivado de un liposacárido de la bacteria Gram negativa Salmonella minnesota cepa R595. Las proteínas de la célula huésped (HCP), el ADN y el ADN del baculovirus recombinante infeccioso son posibles impurezas y son eliminadas en el proceso de depuración. Otras impurezas tales como lípidos o hidratos de carbono están presentes en pequeñas cantidades insignificantes (18).

¿Contaminación de Cervarix con ADN?

El fabricante de Cervarix sostiene que la vacuna no está contaminada con ADN o de otros productos a partir del vector del baculovirus o las células de insecto. El baculovirus, Autographa nucleopoliedrovirus californica (AcMNPV) , del que se ha determinado la secuencia completa de su genoma, tiene forma circular, con su genoma en una cadena doble de ADN superenrollada, de aproximadamente unas 130 kilobases empaquetadas en una nucleocápside en forma de varilla. Estas nucleocápsidas pueden alargarse longitudinalmente y por lo tanto el genoma del virus puede de manera efectiva acomodar grandes inserciones de ADN extraño. Tales inserciones de genes extraños en el genoma de AcMNPV provoca la producción de vectores de expresión del baculovirus; los virus recombinantes genéticamente modificados pueden contener genes extraños, que se pueden expresar en células de insecto bajo el control de un promotor de genes de baculovirus (19). Los baculovirus infectan y son viables en células humanas. Los baculovirus se expresan genéticamente mediante en una amplia serie de células de vertebrados, incluso en las células humanas (20) y numerosos genes de los baculovirus se expresan en las células humanas (21, 22). Los baculovirus contienen dos genes que impiden la apoptosis y de ese modo facilitan el avance de las células cancerígenas (23). Los baculovirus contienen pequeños genes de ADN que codifican micro-ARN, con 8 dianas virales y 64 celulares, incluyendo la interferencia con la máquina de defensa inmune del huésped (24). Existen pruebas de que el ADN del vector del baculovirus y las células de insecto no deben contaminar la vacuna Cervarix.

Conclusión

La contaminación con ADN de las vacunas contra el VPH es un problema muy serio, y no puede considerarse una consecuencia normal o aceptable de la producción de las vacunas recombinantes, como trata de asegurar la FDA. Las falsas afirmaciones de la FDA ponen en tela de juicio no sólo a Gardasil, sino también a Cervarix. Un organismo verdaderamente independiente debe llevar a cabo con urgencia estudios sobre la contaminación con ADN y ARN en las dos vacunas.

Referencias

1. Cummins J and Ho MW. The HPV vaccine controversy. Science in Society 41, 24-26, 2009,
2. Retrospective International Survey and HPV Time Trends Study Group Human papillomavirus genotype attribution in invasive cervical cancer: a retrospective cross-sectional worldwide study. Lancet Oncology 2010, 11, 1048-56.
3. Cummins J. Recombinant Cervical Cancer Vaccines. Science in Society 29, 20, 2006.
4. Schmitz M, Driesch C, Jansen L, Runnebaum IB, Dürst M.Non-Random Integration of the HPV Genome in Cervical Cancer. PLoS One 2012, 7, e39632
5. Šepetienė A, Gudlevičienė Ž, Bumbulienė Ž, Drąsutienė GS, Didžiapetrienė J. HPV16 integration in Lithuanian women with cervical neoplasia. Centr Eur J Med. 2011, 6, 205–212.
6. Zheng ZM, Baker CC. Papillomavirus genome structure, expression, and post-transcriptional regulation. Frontiers in Biosciences 2006, 11, 2286-302.
7. Myklebust MP, Bruland O, Fluge Ø, Skarstein A, Balteskard L, Dahl O. MicroRNA-15b is induced with E2F-controlled genes in HPV-related cancer. British Journal of Cancer 2011, 105, 1719-25
8. Lajer CB, Garnæs E, Friis-Hansen L, Norrild B, Therkildsen MH, Glud M, Rossing M, Lajer H, Svane D, Skotte L, Specht L, Buchwald C, Nielsen FC The role of miRNAs in human papilloma virus (HPV)-associated cancers: bridging between HPV-related head and neck cancer and cervical cancer. British Journal of Cancer 2012, 106, 1526-34.
9. Cummins J, Ho MW.  The HPV Vaccine Controversy. Science in Society 41, 2009, 24
10. Europe, the Middle East and Africa (EMEA) EU regulatory agency for the evaluation of medicinal products  Silgard, INN-Human Papillomavirus Vaccine [Types 6, 11, 16, 18]  2006 http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_-_Scientific_Discussion/human/000732/WC500051547.pdf
11. SaneVax,Inc.SANE Vax to FDA: Recombinant HPV DNA found in multiple samples of Gardasil August29,2011 http://sanevax.org/sane-vax-to-fda-recombinant-hpv-dna-found-in-multiple-samples-of-gardasil/
12. Business Wire SANE Vax, Inc. Reports Human Papillomavirus (HPV) DNA Contamination in Gardasil™ To FDA: Requests Public Safety Investigation Sept. 6,2011 http://www.businesswire.com/news/home/20110906005422/en/SANE-Vax-Reports-Human-Papillomavirus-HPV-DNA
13. US Food and Drug Administration FDA Information on Gardasil – Presence of DNA Fragments Expected, No Safety Risk Page Last Updated: 10/21/2011 http://www.fda.gov/BiologicsBloodVaccines/Vaccines/ApprovedProducts/ucm276859.htm
14. World Health Organization WHO Study Group on Cell Substrates for Production of Biologicals 5.3. Approaches in reducing risk of cell DNA – Discussion 2007 http://www.who.int/biologicals/publications/meetings/areas/vaccines/cells/Cells.FINAL.MtgRep.IK.26_Sep_07.pdf
15. Kastenmayer JP, Ni L, Chu A, Kitchen LE, Au WC, Yang H, Carter CD, Wheeler D, Davis RW, Boeke JD, Snyder MA, Basrai MA. Functional genomics of genes with small open reading frames (sORFs) in S. cerevisiae. Genome Research 2006, 16, 365-73.
16. Schubbert R, Renz D, Schmitz B, Doerfler W. Foreign (M13) DNA ingested by mice reaches peripheral leukocytes, spleen, and liver via the intestinal wall mucosa and can be covalently linked to mouse DNA. Proc Natl Acad Sci U S A 1997, 94, 961-6.
17. Ho MW. Intercommunication via circulating nucleic acids. Science in Society 42, 46-48, 2009.
18. Europe, the Middle East and Africa (EMEA) EU regulatory agency for the evaluation of medicinal products SCIENTIFIC DISCUSSION 2. Quality aspects 2007 http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_ Scientific_Discussion/human/000721/WC500024636.pdf
19. Haines,F,Possee,R,King,L Baculovirus Expression Vectors 2005 http://www.expressiontechnologies.com/pdf/BEV%20Paper.pdf
20. Airenne,K,Makkonen,K,Mähönen.A.Ylä-Herttuala,S. Chapter 12 Baculoviruses Mediate Efficient Gene Expression in a Wide Range of Vertebrate Cells  Otto-Wilhelm Merten and Mohamed Al-Rubeai (eds.), Viral Vectors for Gene Therapy: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Vol. 737, DOI 10.1007/978-1-61779-095-9_12, © Springer Science+Business Media, LLC 2011
21. Fujita R, Matsuyama T, Yamagishi J, Sahara K, Asano S, Bando H. Expression of Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus genes in mammalian cells and upregulation of the host beta-actin gene. Journal of Virology 2006, 80, 2390-5.
22. Liu CY, Wang CH, Wang JC, Chao YC. Stimulation of baculovirus transcriptome expression in mammalian cells by baculoviral transcriptional activators. Journal of Genetic Virology 2007, 88, 2176-84.
23. Clem RJ, Hardwick JM, Miller LK. Anti-apoptotic genes of baculoviruses Cell Death & Differentiation 1996, 3, 9-16.
24. Singh J, Singh CP, Bhavani A, Nagaraju J. Discovering microRNAs from Bombyx mori nucleopolyhedrosis virus .Virology 2010, 407, 120-8

Fuente: http://www.i-sis.org.uk/DNA_contamination_of_HPV_vaccines.php

El Prof. Joe Cummins es profesor emérito de genética de la Universidad de Western Ontario, y ha sido uno de los primeros científicos en trabajar en la seguridad de los cultivos, los alimentos, la salud humana y el medio ambiente. Antes de viajar a Occidente en 1972 fue profesor de Genética en la Universidad de Rurgers y en la Universidad de Washington (Seatle). Desde 1968 está involucrado en una serie de cuestiones ambientales relacionadas con el mercurio, el amianto, los PCB, pesticidas, desechos tóxicos y la Ingeniería Genética. El Prof. Cummins es autor de más de 200 artículos científicos y de divulgación y recientemente ha publicado en la revista Nature Biotecnology, The Ecologist, Biotechnology y Development Review. Vive entre Londres y Ontario, Canadá.

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